Alat Rapid Antigen: Kiến thức cơ bản về phát hiện axit nucleic - Phần 1

Alat nhanh khángren.: Kiến thức cơ bản về phát hiện axit nucleic

1. Phát hiện axit nucleic là gì

Định nghĩa của axit nucleic: axit nucleic là một loại đại phân tử sinh học được kết nối bởi nucleotides hoặc deoxynucleotide thông qua 3 ', 5' - liên kết diester phosphate.

Axit nucleic có chức năng sinh học rất quan trọng, chủ yếu lưu trữ và truyền thông tin di truyền.

2. Phân loại axit nucleic

Các đại phân tử axit nucleic có thể được chia thành hai loại: axit doxyribonucleic (DNA) và axit ribonucleic (RNA).

3. Thành phần axit nucleic

DNA và RNA được hình thành bằng cách kết nối đầu và đuôi của nucleotide, bao gồm năm yếu tố: c, h, o, n và p.dna là vật liệu di truyền của hầu hết các sinh vật. RNA là một vật liệu di truyền của một vài loại virus miễn phí DNA, chẳng hạn như vi-rút HIV, Cúm, SARS, v.v. Chiều dài RNA trung bình là khoảng 2000 nucleotide, trong khi DNA của con người rất dài, khoảng 3x10 ^ 9 nucleotide.

4. Chức năng của axit nucleic

Nó đóng vai trò lưu trữ và truyền thông tin di truyền trong sao chép protein và tổng hợp. Axit nucleic không chỉ là vật liệu di truyền cơ bản mà còn đóng vai trò quan trọng trong sinh tổng hợp protein. Do đó, nó đóng vai trò quyết định trong một loạt các hiện tượng cuộc sống quan trọng như tăng trưởng, di truyền và biến thể.

DNA và RNA là axit nucleic. Sự khác biệt trong thành phần hóa học của họ như thế nào như sau:

5. Phương pháp thử

Phương pháp phát hiện axit nucleic chủ yếu phát hiện axit nucleic mục tiêu trong mẫu bằng cách khuếch đại đồng thời axit nucleic mục tiêu và tạo ra tín hiệu có thể phát hiện được. Nó có thể được áp dụng cho phát hiện axit nucleic trong vi sinh lâm sàng, sàng lọc máu, chẩn đoán và phòng ngừa bệnh di động và các lĩnh vực khác.

Hiện tại, các phương thức chính được sử dụng như sau:

Một. Bộ khuếch đại phụ thuộc axit nucleic

NASBA là một kỹ thuật mới để khuếch đại isottormal của RNA được trung gian bởi một cặp mồi, là trình tự nucleotide liên tục và đồng đều và cụ thể trong ống nghiệm. Phản ứng được thực hiện ở 42oC và mẫu RNA có thể được khuếch đại khoảng 109 lần trong 2 Giờ. Nguyên tắc của NASBA là trích xuất RNA virus, thêm AMV Revers Grastcriptase, RNase H, T7RNA POLYMERASE và mồi để khuếch đại. Toàn bộ phản ứng được chia thành pha không theo chu kỳ và pha tuần hoàn: Trong pha không theo chu kỳ, Primer I và mẫu RNA được ủ để tổng hợp cdna theo tác động của AMV Reverse Reverse để tạo thành RNA: DNA Hybrid, sau đó RNaseS đã phân hủy RNA, Primer II và CDNA được ủ để tổng hợp các chuỗi bổ sung DNA thứ hai theo hành động của T7RNA Polymerase, DNA hai sợi có thể được bắt đầu bằng trình tự quảng cáo của nó để sao chép RNA. RNA có thể được sao chép ngược thành DNA theo tác động của bản sao ngược, nhập giai đoạn lưu thông và khuếch đại một số lượng lớn các mẫu.

b. Phẫu thuật khuếch đại trung gian

Nguyên lý kỹ thuật của TMA về cơ bản giống như Nasba. Sự khác biệt nhỏ là TMA sử dụng bảng điều khiển ngược MMLV và T7RNA polymerase. Bản gốc đảo ngược MMLV có cả hoạt động transcriptase đảo ngược và hoạt động RNase H. Phản ứng được thực hiện ở 41,5oC và mẫu RNA có thể được khuếch đại khoảng 109 lần trong 1 giờ.

C. Phản ứng chuỗi xúc tác ligase (LCR)

LCR là một công nghệ khuếch đại đầu dò dựa trên kết nối các đầu dò oligonucleotide phụ thuộc vào phân tử mục tiêu. Nó là một công nghệ khuếch đại in vitro đầy hứa hẹn được phát triển sau khi nguyên tắc PCR.its là hybridize hai đầu dò DNA sợi độc duy nhất của oligonucleotide với trình tự mục tiêu. Khi hai đầu dò DNA phân đoạn mờ dần với mẫu mà không đột biến, nếu hai đầu dò nằm liền kề và không có khoảng thời gian nucleotide ở giữa, chúng có thể được kết nối theo tác động của ligase và chuỗi mới sau khi kết nối có thể được sử dụng như một Mẫu để hướng dẫn kết nối trong chu trình tiếp theo để tạo chuỗi phụ mới. Nếu đột biến cơ sở của nucleotide xảy ra trong phần kết nối, phản ứng kết nối không thể xảy ra và phản ứng khuếch đại bị chấm dứt.

d. Xét nghiệm phản ứng chuỗi polymerase (PCR)

Nguyên tắc cơ bản của công nghệ PCR tương tự như quy trình sao chép tự nhiên của DNA, và độ đặc hiệu của nó phụ thuộc vào các mồi oligonucleotide bổ sung cho cả hai đầu của trình tự mục tiêu.pcr bao gồm ba bước phản ứng cơ bản: gia hạn ủ khử trùng.

Biến tính DNA mẫu: Sau khi DNA mẫu được làm nóng đến khoảng 93oC trong một thời gian nhất định, chuỗi đôi DNA hoặc DNA sợi đôi được hình thành bởi khuếch đại PCR được phân tách để tạo thành một sợi duy nhất, để nó có thể được kết hợp với mồi để chuẩn bị cho vòng phản ứng tiếp theo.

Ủng ủ (giới thiệu) của DNA DNA và mồi: Sau khi DNA mẫu được làm nóng và biến tính thành một sợi, nhiệt độ giảm xuống còn khoảng 55oC và mồi được ghép nối với chuỗi bổ sung của DNA mẫu.

Tiện ích mở rộng mồi: Trong hành động của Taqdna polymerase, kết hợp mồi Mẫu DNA sử dụng DNTP làm nguyên liệu thô và trình tự mục tiêu dưới dạng mẫu để tổng hợp chuỗi sao chép bán lại mới được bổ sung cho chuỗi DNA mẫu theo nguyên tắc ghép đôi và bán lại nhân rộng. Lặp lại ba quá trình mở rộng ủ theo chu kỳ cyclic để thu được nhiều chuỗi sao chép bán giữ lại \", và chuỗi mới này có thể trở thành mẫu cho chu kỳ tiếp theo. Nó mất 2-4 phút và 2-3 giờ để khuếch đại gen mục tiêu Để được mở rộng hàng triệu lần. Để phát hiện RNA HIV, chúng ta cần sao chép RNA vào cDNA bằng cách phản ứng sao chép ngược, sau đó khuếch đại PCR với CDNA dưới dạng mẫu. Phản ứng này được gọi là RT-PCR.