Alat Rapid Antigen: Kiến thức cơ bản về phát hiện axit nucleic - Phần 2

Alat nhanh khángren.: Biết phát hiện axit nucleic

PCR định lượng thời gian thực

Công nghệ PCR định lượng về huỳnh quang theo thời gian thực Đề cập đến phương pháp thêm các nhóm huỳnh quang vào hệ thống phản ứng PCR, sử dụng tín hiệu huỳnh quang để theo dõi toàn bộ quá trình PCR trong thời gian thực và cuối cùng phân tích định lượng mẫu không xác định thông qua đường cong tiêu chuẩn.

Nguyên tắc của công nghệ này là đánh dấu đầu dò với nhóm huỳnh quang, đánh dấu nhóm huỳnh quang r ở cuối 5 'và đánh dấu nhóm dập tắt Q ở cuối 3 '. Khi không có khuếch đại PCR, nhóm huỳnh quang được dập tắt và không phát ra huỳnh quang do khoảng cách không gian chặt chẽ giữa nhóm huỳnh quang và nhóm dập tắt; khi PCR được khuếch đại, đầu dò cụ thể có nhãn huỳnh quang được kết hợp trên mẫu đồng thời. Vị trí liên kết giữa đầu dò có nhãn huỳnh quang và mẫu nằm giữa các mồi thượng nguồn và xuôi dòng. Đầu dò huỳnh quang bị thủy phân bằng cách sử dụng hoạt động diệt trừ 5 '3' của enzyme TAQ và nhóm huỳnh quang được phát hành. Bởi vì nó được tách ra khỏi nhóm dập tắt trong không gian, nó phát ra huỳnh quang. Huỳnh quang phát ra có thể được phát hiện bởi đầu dò huỳnh quang, được khuếch đại và phát hiện cùng một lúc, để nhận ra \"Phát hiện \" thời gian thực \". Công nghệ này không Chỉ nhận thấy bước nhảy vọt của PCR từ bán định lượng đến định lượng, nhưng cũng có các đặc tính đặc trưng mạnh mẽ, mức độ tự động hóa cao và giải quyết hiệu quả vấn đề ô nhiễm PCR so với PCR thông thường.

Phát hiện DNA sợi phân nhánh - BDNA

BDNA là một phương pháp để phát hiện định lượng RNA loại 1 HIV trong plasma.bdna đề cập đến một đoạn DNA tổng hợp với chuỗi bên. Mỗi chuỗi bên có thể được dán nhãn với một điểm đánh dấu phấn khích. RNA của HIV được phát hành từ các hạt virus bằng cách ly tâm, và sau đó chụp vào micropores với đầu dò chụp

Cụ thể liên kết với một phần khác của RNA virus và cũng liên kết với đầu dò khuếch đại trước. Sau đó, sau đó được lai với đầu dò khuếch đại, đầu dò BDNA. Hai bộ đầu dò mục tiêu đặc biệt liên kết với các vùng khác nhau của gen Pol RNA.Hivrna Oligonucleotide phức hợp được hình thành trong micropores. Tín hiệu hóa học có thể được khuếch đại sau khi ủ với chất nền chiết hóa. Nó được định lượng bằng cường độ phát sáng, tỷ lệ thuận với hàm lượng HIVRNA trong mẫu.bdna không có ô nhiễm chéo của Amplicons, đó là một tiến bộ lớn So với PCR.BDNA có hàng chục đầu dò bao gồm toàn bộ bộ gen, có thể dễ dàng phát hiện một số biến thể HIV, nhưng độ nhạy không nhạy cảm như PCR. Cải thiện độ nhạy cảm của BDNA là một khó khăn lớn.

Bước phát hiện.

Quá trình phát hiện công nghệ phát hiện chất lượng axit HIV được chia thành chiết xuất axit nucleic, tổng hợp sao chép ngược của CDNA, phản ứng khuếch đại PCR, phân tích định tính các sản phẩm khuếch đại, đánh giá kết quả và báo cáo hoàn thành.